生物實(shí)驗(yàn)室里，細(xì)胞培養(yǎng)這項(xiàng)功夫，它既是最基礎(chǔ)的，又是極其考驗(yàn)手上功夫的。好多人以為，只要培養(yǎng)基添加正確，溫度設(shè)置妥當(dāng)就可以。然而，事實(shí)上真正有過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)歷的人都清楚，操作時(shí)的習(xí)慣以及環(huán)境方面諸多細(xì)節(jié)，才是決定這件事成功或者失敗的關(guān)鍵因素。

細(xì)胞培養(yǎng)前的準(zhǔn)備工作

進(jìn)行培養(yǎng)之前的準(zhǔn)備工作常常受到低估，超凈臺(tái)起碼要提前開(kāi)啟紫外進(jìn)行照射半小時(shí)，臺(tái)面需使用75%酒精認(rèn)真擦拭，所有的移液管、培養(yǎng)瓶以及槍頭都得提前放置進(jìn)臺(tái)內(nèi)，我有著把試劑依照使用順序擺放的習(xí)慣，以此防止在操作過(guò)程中出現(xiàn)手忙腳亂的情況，環(huán)境的溫濕度同樣會(huì)對(duì)培養(yǎng)效果產(chǎn)生影響，在夏天濕度較高的時(shí)候，培養(yǎng)皿的蓋子容易凝結(jié)水珠，這就需要對(duì)操作節(jié)奏加以調(diào)整。

細(xì)胞培養(yǎng)如何保證無(wú)菌

細(xì)胞培養(yǎng)的生命線是無(wú)菌操作，每次操作前需用酒精噴手，手套要勤更換，火焰滅菌時(shí)，瓶口過(guò)火兩三秒即可，時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)損壞瓶口密封圈，移液管用一次就要換，千萬(wàn)別為省耗材而重復(fù)使用，我見(jiàn)過(guò)不少污染案例，其原因都在于操作時(shí)說(shuō)話、打噴嚏，或者手臂在敞口容器上方經(jīng)過(guò)。

細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)怎么判斷

憑形態(tài)去看狀態(tài)最為直觀，狀態(tài)的好壞取決于形態(tài)。對(duì)于貼壁細(xì)胞而言，若其伸展良好、邊緣清晰且透亮，那就表明細(xì)胞存活舒適、狀態(tài)良好；要是細(xì)胞變得圓形、邊緣發(fā)黑且漂浮增多，這就意味著細(xì)胞狀態(tài)在變差、下滑了。傳代時(shí)密度必須把握精準(zhǔn)，密度太稀細(xì)胞生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)不佳、不愿意生長(zhǎng)，而密度太密細(xì)胞又易于老化。通常，我會(huì)在細(xì)胞長(zhǎng)到大約八成的時(shí)候進(jìn)行傳代操作，因?yàn)樘幱谶@個(gè)時(shí)候的細(xì)胞活力是最強(qiáng)勁充實(shí)的，開(kāi)展相關(guān)實(shí)驗(yàn)所獲得的數(shù)據(jù)也更為穩(wěn)定確切。

細(xì)胞培養(yǎng)污染怎么處理

一旦察覺(jué)到培養(yǎng)基呈現(xiàn)渾濁狀態(tài)，pH值發(fā)生顏色改變，并且在顯微鏡下出現(xiàn)小黑點(diǎn)狀物體，基本上就能夠判定是受到污染了。細(xì)菌造成的污染在當(dāng)天便能夠被察覺(jué)出來(lái)，霉菌造成的污染則需要兩到三天時(shí)間，支原體造成的污染最為隱匿。遇到這種情形時(shí)不要遲疑，應(yīng)當(dāng)將整批培養(yǎng)物直接丟棄，經(jīng)過(guò)84消毒液浸泡之后再進(jìn)行處理。培養(yǎng)箱必須要進(jìn)行徹底的消毒，所有試劑都要重新配置，寧可多花費(fèi)幾天時(shí)間，也不要留存隱患從而對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。

你于細(xì)胞培育進(jìn)程當(dāng)中遭遇過(guò)哪一種最難搞的污染，那時(shí)是怎樣去處理的呢？