在分子生物學(xué)相關(guān)實驗里頭，PCR純化試劑盒屬于連接擴增以及下游實驗的關(guān)鍵橋梁。面對市面上種類繁多的產(chǎn)品，怎樣選對試劑盒，又怎樣用好試劑盒，這直接對測序、克隆等后續(xù)實驗的成敗產(chǎn)生影響。在此結(jié)合多年實驗操作積累的經(jīng)驗，跟大家講講那些說明書上沒明確表述，但實際上極其重要的細節(jié)。

如何確保高純度

磁珠或離心柱對對核酸的選擇性結(jié)合，乃是純度要核心所在。不少用戶察覺純化后產(chǎn)物存有抑制劑殘留，常常是緣洗滌步驟太過草率所致。一定要保證洗滌緩沖液于柱膜上充分停留一-兩分鐘 ，使得乙醇等雜質(zhì)被完全洗脫。針對微量樣本，選用磁珠法能夠最大程度減少樣本損失，與此同時借助兩次洗滌步驟來提高純度，這對于后續(xù)的熒光定量PCR特別要緊。

洗脫體積有什么講究

洗脫效率可不是單純依照“體積越大產(chǎn)量越高”的那種規(guī)律。當(dāng)洗脫液體積比15微升還要低的時候，因為膜表面張力起的作用，液體有可能沒辦法完全覆蓋住膜區(qū)域，致使回收率一下子大幅下降。與之相反，要是體積超過了50微升，雖說能夠完全浸潤膜，但產(chǎn)物卻被過度稀釋了。對于那些需要高濃度的樣本而言，建議采用分步洗脫的方法：先使用20微升洗脫液孵育5分鐘之后收集起來，接著再用10微升進行二次洗脫，如此一來往往能夠得到理想的濃度與總量的平衡狀態(tài)。

如何匹配不同樣本類型

對應(yīng)不一樣的樣本類型，選品牌邏輯有著明顯的差別。在處理百微克等級的高豐度擴增產(chǎn)物之際，常規(guī)離心柱試劑盒依靠快速便捷的長處就能夠勝任。然而當(dāng)碰到石蠟包埋組織得來的、環(huán)境樣本這類復(fù)雜模板時，其擴增產(chǎn)物常常帶有更多抑制劑，此時磁珠法試劑盒的“多次洗滌”優(yōu)勢就顯現(xiàn)出來。另外，對于打算開展三代測序的長片段產(chǎn)物，一定要確認(rèn)試劑盒對長鏈DNA的回收偏好性，防止短片段富集造成數(shù)據(jù)偏差。

試劑盒可以這樣保存

多數(shù)用戶慣于把所有組分一同冷藏，然而這般實際上是個錯誤認(rèn)知。含有蛋白酶K或者特定酶類的混合液，反復(fù)凍溶就會致使活性降低。正確的做法是把洗滌緩沖液、結(jié)合液這類鹽溶液在常溫下避光存放，唯有將酶混合物以及磁珠懸液分裝以后進行冷凍。每次實驗之前僅取出單次使用量，如此能夠有效延長整盒試劑的使用期限。另外，要留意檢查磁珠是不是有沉降結(jié)塊，使用之前一定要渦旋震蕩直至完全均勻。

于實際操作期間，你有沒有碰到過，因試劑盒選取不恰當(dāng)，致使實驗反復(fù)出現(xiàn)的情形呢？歡迎來分享你的經(jīng)驗，讓大家一塊兒探討更高效地使用技巧。