對于投身生命科學(xué)研究領(lǐng)域的科研工作者而言，ATCC細胞是被廣泛認可的具備標(biāo)準(zhǔn)化特質(zhì)的細胞資源，其優(yōu)勢體現(xiàn)在來源清晰明確、背景資料完備周全，能夠為實驗供應(yīng)可靠的數(shù)據(jù)支持。然而在實際進行選購以及完成培養(yǎng)的進程當(dāng)中，諸多新手會遭遇各式各樣的問題，本文會圍繞幾個至關(guān)重要的要點展開詳細闡釋，助力大家減少不必要的彎路。
怎么選對ATCC細胞株
當(dāng)著ATCC官網(wǎng)里那滿目琳瑯的細胞株，新手常常會覺得不知該從哪兒開始著手。挑選的時候頭一件得弄清楚實驗?zāi)康?，是去進行藥物篩選，還是做基因功能研究，又或者是構(gòu)建疾病的模型。不同的目的對于細胞的種屬、組織來源、生長特性的要求都是不一樣的。就好比研究免疫機制，一般會選懸浮生長的免疫細胞；而構(gòu)建腫瘤模型，就得留意貼壁生長的腫瘤細胞系。
遺傳背景以及培養(yǎng)條件的細胞株同樣是篩選重點所在，認真查看由ATCC官網(wǎng)所提供的產(chǎn)品說明，去確認細胞的種屬來源情況，確認是否屬于永生化細胞，確認有無基因突變方面的信息，與此同時，要對實驗室現(xiàn)有的條件能不能滿足其培養(yǎng)需求作出評估，像有些細胞是需要特定培養(yǎng)基的，有些細胞是需要特定二氧化碳濃度的，有些細胞是需要基質(zhì)包被的，這些細節(jié)對于后續(xù)實驗的順利開展有著直接影響。
購買前必須確認的細節(jié)
下單之前，在確定好目標(biāo)細胞株之后，還有幾個關(guān)鍵信息得去核實。首先呢，是細胞的代數(shù)，ATCC所提供的細胞大多數(shù)都是低代數(shù)復(fù)蘇凍存品，這就表明細胞狀態(tài)更貼近原始特征。但是要留意，從ATCC直接訂購以后，不同代理商的庫存狀況有可能對實際收到的細胞代數(shù)產(chǎn)生影響，一定要提前溝通加以確認。
緊接著是與之配套的試劑的預(yù)備工作。美國模式培養(yǎng)物集存庫會于產(chǎn)品頁面清晰地羅列推薦使用的培養(yǎng)基、血清以及添加物。切不可隨性地去更換這些配套使用的試劑，不然的話就有可能致使細胞形態(tài)發(fā)生改變或者生長變得遲緩。要是實驗室已然存有一部分試劑，能夠預(yù)先把產(chǎn)品說明書發(fā)給技術(shù)人員，讓他們幫忙去確認是否相互兼容，如此一來便能夠防止因試劑不匹配而造成的損失。
細胞復(fù)蘇與培養(yǎng)注意事項
接收到 ATCC 細胞之后，復(fù)蘇的操作乃是決定細胞活性的首個步驟。建議依照 ATCC 官方所給出的復(fù)蘇方案去執(zhí)行，采用 37℃的水浴來進行快速解凍，整個流程需掌控在 1 至 2 分鐘以內(nèi)。復(fù)蘇完成后應(yīng)當(dāng)馬上運用預(yù)熱的完全培養(yǎng)基去稀釋凍存液，通過離心來去除 DMSO，接著接入培養(yǎng)瓶。操作的進程要柔和，防備機械損傷。
進入到培養(yǎng)階段之后，建議去建立起詳細的細胞日志，記錄下每次傳代的日期，每次傳代的比例，每次傳代的形態(tài)變化，還有培養(yǎng)箱參數(shù)。ATCC細胞對于培養(yǎng)條件的一致性有著較高要求，哪怕是同一株細胞，不同批次的培養(yǎng)操作也應(yīng)當(dāng)保持穩(wěn)定。倘若出現(xiàn)細胞生長速度變化或者形態(tài)異常，就應(yīng)及時去回顧記錄，排查是操作問題還是培養(yǎng)環(huán)境波動所導(dǎo)致的。
常見問題與解決方案
在細胞的培育進程當(dāng)中，新手最為憂心的問題便是細胞遭受污染。其中緣由在于，除了細菌以及真菌所造成的污染外，支原體污染更為隱匿，然而卻會對實驗結(jié)果產(chǎn)生極為嚴(yán)重的影響。故而，可以給出建立在定期基礎(chǔ)上的建議，也就是運用PCR法或者相關(guān)檢測試劑盒針對細胞展開支原體檢測工作。一旦檢測結(jié)果顯示發(fā)現(xiàn)了污染情況，那么務(wù)必秉持果斷堅決的態(tài)度將其棄用，并且要對培養(yǎng)箱以及超凈臺進行徹底的消毒處理，一定不要懷有任何僥幸心理。
常見的另一個問題是細胞生長得緩慢，這興許跟傳代密度、培養(yǎng)基新鮮程度或者血清批次存在關(guān)聯(lián)，ATCC細胞一般對血清質(zhì)量頗為敏感，更換血清批次之際應(yīng)當(dāng)先進行小規(guī)模測試，要是細胞出現(xiàn)老化現(xiàn)象或者形態(tài)異常，能夠考慮重新從ATCC訂購低代數(shù)細胞，又或者在實驗室搭建種子庫，定期去更新工作細胞批次從而維持實驗穩(wěn)定性。
你在選購或培養(yǎng)ATCC細胞時，最棘手的操作環(huán)節(jié)是哪一步呢？
