基礎(chǔ)研究里,科研細(xì)胞庫屬于那種絕對(duì)不能缺少的資源支撐,它的質(zhì)量會(huì)直接對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性以及可靠性產(chǎn)生作用,面對(duì)市場(chǎng)上各種各樣的細(xì)胞資源,研究人員常常得從來源、鑒定記錄、凍存條件以及其他多個(gè)維度去做綜合評(píng)估,這樣才能夠挑選出真正契合自身課題需求的細(xì)胞株。
科研細(xì)胞庫的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有哪些
應(yīng)該附帶完整背景信息的一份合格細(xì)胞資源,其中包括物種來源、組織類型、細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)特性以及是否經(jīng)過支原體檢測(cè)。通常會(huì)提供短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)圖譜作為身份憑證的權(quán)威細(xì)胞庫,能幫助采用新編輯干細(xì)胞群的研究者去驗(yàn)證細(xì)胞系有無交叉污染。另外,凍存管上的標(biāo)簽要清晰標(biāo)注代次、日期和操作人員,防止因信息短缺造成后續(xù)實(shí)驗(yàn)偏差。
如何鑒定細(xì)胞株的純度與活性
細(xì)胞被收到之后,首先要在顯微鏡下面去觀察其形態(tài)是不是均一,有沒有空泡或者顆粒堆積的情況。臺(tái)盼藍(lán)染色能夠快速地判斷存活率,理想的狀態(tài)應(yīng)當(dāng)是高于90%。對(duì)于貼壁細(xì)胞而言,傳代以后六小時(shí)之內(nèi)的貼壁情況能夠反映膜功能的完整性;懸浮細(xì)胞則需要留意細(xì)胞團(tuán)是不是松散均勻。建議同步開展支原體PCR檢測(cè),因?yàn)殡[性污染會(huì)使細(xì)胞代謝狀態(tài)發(fā)生改變,致使藥篩結(jié)果失真。
細(xì)胞庫的凍存與復(fù)蘇注意事項(xiàng)
配制凍存液大多采用按比例將基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清以及二甲基亞砜(DMSO)進(jìn)行配制,其降溫速率需要控制在每分鐘下降大概1℃,最好是使用程序降溫盒,蘇醒的時(shí)候從液氮當(dāng)中取出后要迅速在37℃水浴里進(jìn)行攪動(dòng),以此避免冰晶對(duì)細(xì)胞膜造成損傷,解凍之后應(yīng)當(dāng)立即用完全培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋將DMSO去除掉該離心轉(zhuǎn)速不應(yīng)超過200g,不然機(jī)械力會(huì)致使脆弱細(xì)胞破裂,傳代達(dá)到三次之后才適宜用于正式實(shí)驗(yàn)。
不同研究方向的細(xì)胞庫選擇策略
針對(duì)信號(hào)通路展開研究,得明確細(xì)胞表面受體表現(xiàn)出來的豐度情況,這時(shí)候能夠去查閱文獻(xiàn),或者查看數(shù)據(jù)庫里的基因芯片數(shù)據(jù)。而對(duì)于藥物篩選而言,會(huì)進(jìn)一步關(guān)注細(xì)胞是不是攜帶著常見的突變位點(diǎn),以及群體遺傳背景是不是穩(wěn)定。原代細(xì)胞雖說更貼近生理狀態(tài),然而批次之間存在較大差異,所以建議同時(shí)購(gòu)買多管用于凍存的液氮管,以此來降低批次效應(yīng)。不管是哪一種選擇,索要近來年份的STR檢測(cè)報(bào)告以及支原體陰性證明,都是必然需要進(jìn)行的步驟。
進(jìn)行科研細(xì)胞庫選購(gòu)之際,你可曾因細(xì)胞狀態(tài)并非穩(wěn)定而耗費(fèi)數(shù)周實(shí)驗(yàn)時(shí)間呢?歡迎于評(píng)論區(qū)去分享你用以驗(yàn)證細(xì)胞質(zhì)量的有效辦法。




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