關(guān)于生命科學(xué)基礎(chǔ)研究里頭，PCR試劑盒屬于基因擴增的關(guān)鍵工具。針對眾多品牌以及型號，怎樣去挑選出穩(wěn)定且特異又高效的試劑盒這個事兒，直接關(guān)聯(lián)到實驗數(shù)據(jù)具備的可信度，還有項目的推進進度呢。

試劑盒怎么選

起初要核查組分的完整性，預(yù)混液、熱啟動酶、dNTPs、Mg2+以及配套緩沖液都得完備，并且說明書清楚標明儲存條件以及有效期。接著要驗證適配性，是普通PCR還是實時熒光PCR呢？不同儀器的升降溫速率與檢測通道存在差別，在選購之前需查閱兼容性列表。

除此以外要關(guān)注樣本的類型，針對于來自植物、土壤、血液又或者是組織等不一樣來源的核酸，有部分試劑盒加進了具備特異性抑制劑去除功能的成分，能夠起到有效減少假陰性的作用。面臨預(yù)算處在有限狀態(tài)時，需去對比每次反應(yīng)價格以及有著可檢測特性的拷貝數(shù)下限，這樣一來性價比身為重要考量也就凸顯出來了。

污染如何避免

氣溶膠造成的污染，乃是PCR實驗室一直難以根治的棘手問題。要優(yōu)先挑選那種含有dUTP以及UNG酶體系的試劑盒，在進行擴增以前，將含有尿嘧啶的被污染模板予以降解，從根源之處截斷殘留產(chǎn)物再次進行擴增的可能性。操作的時候，一定得劃分區(qū)域，分為試劑準備區(qū)、核酸提取區(qū)、擴增分析區(qū)，人員要朝著一個方向流動。

于每一回實驗之際帶上無模板對照也就是NTC，要是NTC呈現(xiàn)出擴增曲線的情況，那就表明存在污染現(xiàn)象。運用帶有濾芯的吸頭，將試劑盒組分依照單次使用的數(shù)量進行分裝。定時使用核酸清除劑去擦拭生物安全柜以及移液器，記錄各個批次試劑盒的背景Cq值，以此方便進行橫向?qū)Ρ取?/p>

靈敏度如何提升

挑選宣稱檢測下限低至個位數(shù)拷貝的試劑盒，用于低豐度靶標，優(yōu)化退火溫度梯度，通常在以引物Tm值±5℃為范圍的區(qū)間內(nèi)尋找最佳溫度，適當增加循環(huán)數(shù)至40 - 45個，或者延長延伸時間10 - 20秒，均可放大微弱信號。

若那塊模板有著稱得上高GC含量的情況又呈現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)狀況，那么有可能要添加處于1到1.5M濃度范圍的甜菜堿或者處于5%至10%比例區(qū)間的DMSO。運用熱啟動聚合酶并搭配專用的具備增強作用的緩沖液，能夠讓非特異性條帶的出現(xiàn)數(shù)量有所減少。針對那些極其稀有少見的樣本，建議先開展10到15個循環(huán)次數(shù)的預(yù)擴增操作，之后再提取產(chǎn)物給予第二輪巢式PCR處理。