研究用的ELISA試劑盒，乃是生命科學實驗室中進行蛋白濃度檢測之時，經(jīng)常會用到的工具，然而，面對著數(shù)量眾多的品牌以及各種各樣的規(guī)格，許許多多的研究者常常會覺得根本不知道該從哪里入手。挑選出恰當?shù)漠a(chǎn)品，這直接和實驗數(shù)據(jù)的可靠性以及重復性有著關(guān)聯(lián)，這是需要從多個不同的維度去認真仔細地進行考量的。

重復性如何保證

板內(nèi)重復性以及板間重復性，乃是評價ELISA試劑盒穩(wěn)定性的關(guān)鍵硬性指標。質(zhì)量優(yōu)良的試劑盒說明書，會給出詳盡的變異系數(shù)數(shù)據(jù)，通常而言，板內(nèi)CV應(yīng)當?shù)陀?0%，板間CV低于15%。你能夠借助預(yù)實驗，檢測同一樣本多次測量值的波動范圍，要是數(shù)值離散度過大，那就表明試劑盒本身批次差異控制欠佳，后續(xù)正式實驗的結(jié)果也極難讓人信服。

特異性怎么判斷

特定性致使試劑盒能否僅捕獲目標分子，卻將結(jié)構(gòu)相似的干擾蛋白予以忽略。查閱說明書之際，著重留意交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)之處，瞧瞧廠家有無對同家族別的蛋白展開測試。比如檢測某一細胞因子之時，要確認該試劑盒能不能識別其受體或者其它同源物。必要之時可自行設(shè)定加標回收實驗，借助添加高濃度干擾物來驗證檢測信號有沒有出現(xiàn)異常變化。

靈敏度怎樣驗證

能被試劑盒檢測到的最低目標物濃度就是靈敏度，一般用最低檢測限來表示。不同實驗對于靈敏度的要求差別極大，在檢測低豐度樣本的時候，選擇LOD比預(yù)期樣本濃度低一個數(shù)量級的產(chǎn)品會更為穩(wěn)妥。要注意區(qū)分分析靈敏度與功能靈敏度這兩者：前者是通過標準曲線擬合而得到的，后者是基于實際低濃度樣本的重復檢測所成的，后者具備更高的參考價值。

操作中有哪些坑

進行實際操作期間，要是洗板沒有做到徹底，就會致使背景偏高，而要是孵育的溫度不均勻，那么就會對酶促反應(yīng)的效率產(chǎn)生影響。在此建議選用預(yù)先包被完成的那種即用型試劑盒，以此來減少因為手工包被所帶來的誤差。在加樣的時候使用多道移液器并且按照同一個順序去進行操作，這樣能夠顯著降低孔之間的差異。除此之外，標準品復溶以后要防止反復凍融，采用分裝保存的方式能夠延長其使用周期。

你平常所使用的ELISA試劑盒，在哪些指標層面遭遇過失誤，歡迎于評論區(qū)域交流相關(guān)經(jīng)歷。