在生命科學(xué)范疇里的基礎(chǔ)技術(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)，其重點是模擬體內(nèi)的環(huán)境，以使細(xì)胞在體外持續(xù)保持生長以及增殖，把控規(guī)范的操作流程還有關(guān)鍵的控制點在于能夠得到可靠實驗結(jié)果的保障，本文會依據(jù)設(shè)備準(zhǔn)備、污染防控以及培養(yǎng)基選擇這三個方面，對實際操作之中的注意事項去進行梳理。

細(xì)胞培養(yǎng)需要哪些基本設(shè)備

操作細(xì)胞培養(yǎng)工作時，超凈工作臺屬于核心操作區(qū)域，它可提供局部百級潔凈環(huán)境。二氧化碳培養(yǎng)箱起到維持恒定溫度、濕度以及5%二氧化碳濃度的作用，這是多數(shù)哺乳動物細(xì)胞生長所需的必要條件。倒置顯微鏡利于每天對細(xì)胞形態(tài)和生長密度加以觀察，而離心機、移液器和細(xì)胞計數(shù)板是傳代與凍存操作里不可缺少的工具之一。所有設(shè)備都要定時校準(zhǔn)和維護，以此保證參數(shù)穩(wěn)定。

如何避免細(xì)胞培養(yǎng)中的污染問題

細(xì)胞培養(yǎng)最常見致使失敗的原因是污染，污染其性質(zhì)主要劃分成細(xì)菌污染、真菌污染以及支原體污染這幾種類型。在進行操作以前，應(yīng)當(dāng)開啟超凈臺的紫外燈去照射30分鐘時長，并且要使用75%濃度的酒精來擦拭相關(guān)臺面。所有會接觸到細(xì)胞的那些耗材都必然得經(jīng)過滅菌處理才行，試劑則需要分開來進行使用，目的是避免出現(xiàn)反復(fù)去打開蓋子的情況。操作的時候動作務(wù)必應(yīng)當(dāng)做到輕柔狀態(tài)，移液管絕對不可以去觸碰瓶口的外側(cè)部分，與此同時建議在培養(yǎng)基里面添加雙抗以此作為預(yù)防方面的措施。一旦察覺到培養(yǎng)液呈現(xiàn)渾濁或者pH出現(xiàn)異常狀況，就應(yīng)該馬上展開隔離并且查找到污染源。

細(xì)胞培養(yǎng)基怎么選更合適

細(xì)胞類型決定選擇培養(yǎng)基，DMEM適用于多種貼壁細(xì)胞，像成纖維細(xì)胞，RPMI - 1640常用于懸浮生長的淋巴細(xì)胞，血清濃度通常為5%至20%，胎牛血清因營養(yǎng)全面被廣泛使用，還需注意補充谷氨酰胺和丙酮酸鈉等成分，部分細(xì)胞需要添加生長因子，建議查閱細(xì)胞供應(yīng)商的說明書，或參考相關(guān)文獻(xiàn)中的成熟配方，首次培養(yǎng)時可先做小規(guī)模測試。

細(xì)胞培養(yǎng)的日常觀察要點

每日都要在顯微鏡之下對細(xì)胞狀態(tài)予以檢查，留意其形態(tài)是不是規(guī)則，貼壁是不是牢固，還有胞質(zhì)有沒有顆粒。正常生長著的細(xì)胞折光性很強，分裂相十分明顯；要是出現(xiàn)了空泡，變圓，或者脫落的情況，這意味著沒準(zhǔn)存在問題。與此同時還要記錄培養(yǎng)基顏色的變化，酚紅指示劑從紅變?yōu)辄S說明pH降低了，需要及時更換培養(yǎng)液。培養(yǎng)密度達(dá)到80%到90%的時候應(yīng)當(dāng)開展傳代，太過密集會致使接觸抑制甚至細(xì)胞老化。