PCR純化試劑盒有必要用嗎

PCR反應(yīng)結(jié)束之后，體系當(dāng)中常常會(huì)殘留數(shù)量眾多的引物，以及dNTP和DNA聚合酶。要是這些雜質(zhì)不被除去的話，就會(huì)對(duì)后續(xù)的酶切實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生直接影響，還會(huì)影響測(cè)序或者克隆實(shí)驗(yàn)。舉例來說，引物殘留會(huì)跟模板進(jìn)行非特異性結(jié)合，進(jìn)而致使測(cè)序信號(hào)變得混亂；而dNTP會(huì)對(duì)連接反應(yīng)里的ATP濃度造成干擾。運(yùn)用專門的純化試劑盒，能夠迅速去除這些干擾物質(zhì)，回收具有高純度的目的片段，從而讓下游實(shí)驗(yàn)的結(jié)果變得更加可靠。

PCR純化試劑盒操作步驟有哪些

PCR 產(chǎn)物里要加入結(jié)合液，加完后得混勻，混勻之后轉(zhuǎn)移至離心柱內(nèi)，放著一分鐘使得 DNA 跟硅膠膜充分結(jié)合，之后以每分鐘 12000 轉(zhuǎn)速度離心 30 秒，把收集管的廢液倒掉，然后加含乙醇的洗滌液，再離心來去除鹽分跟引物碎片，最后于柱膜中央加洗脫液，加完靜置一分鐘后離心，這樣就能得到純凈的 DNA 溶液，整個(gè)流程持續(xù)時(shí)間不超過 10 分鐘。

PCR純化試劑盒回收率怎么提高

洗脫步驟是影響回收率的關(guān)鍵所在， 有著需要將之預(yù)熱到65---70攝氏度的洗脫液， 這能夠顯著增強(qiáng)DNA從膜上解離的效率， 同時(shí)還要?jiǎng)?wù)必注意讓洗脫液徑直精確滴在柱膜正中央， 絕對(duì)不能沾到管壁，存在著對(duì)于低于200bp的小片段， 建議在結(jié)合液里面增加異丙醇的比例， 以此來避免短鏈DNA被沖洗去掉， 另外在最后一次離心之前要使得離心柱在室溫狀況狀態(tài)下徹底晾干， 從而移除殘留乙醇， 不然會(huì)抑制后續(xù)酶反應(yīng)。

如何挑選合適的PCR純化試劑盒

市面上的產(chǎn)品主要分成磁珠法、離心柱法這兩類，磁珠法適宜自動(dòng)化的高通量處理，然而單次成本比較高，離心柱法操作具備靈活性，適合少量樣本的日常實(shí)驗(yàn)，購買時(shí)要著重核對(duì)試劑盒的DNA片段回收范圍，常見規(guī)格是從100bp至10kb，還要留意洗滌液的成分是不是含有毒性有機(jī)物，環(huán)保型配方更適宜長(zhǎng)期使用，有條件的情形下，可以先用標(biāo)準(zhǔn)品去測(cè)試回收率以及純度，再?zèng)Q定是否進(jìn)行批量采購。