生物技術(shù)領(lǐng)域的基石操作便是這細胞培養(yǎng)，然而新手常常易于陷入那“照搬說明書”的誤區(qū)之中。從本質(zhì)上來說，此項技術(shù)所考驗的乃是對于細胞生理需求的領(lǐng)會以及無菌操作的嚴謹程度。在實驗室探尋多年之后，我發(fā)覺與其去生搬硬套那些步驟，倒不如先將幾個決定成敗的關(guān)鍵控制點徹底理解通透。

如何防止細胞污染

細胞房當中，最為大敵的是那肉眼難以瞧見的微生物，防止污染其核心之處為分區(qū)進行管理以及動作要規(guī)范，其中培養(yǎng)基、耗材以及操作區(qū)域必定得實施物理隔離，進入細胞房之前需要去更換專用的實驗服并且要徹底地洗手，操作之際，手臂盡量別在敞口瓶上方去移動，移液槍使用完畢后要即刻更換槍頭，定期對培養(yǎng)箱水盤予以清理并且添加抑菌劑，如此便能大幅度地降低真菌和支原體爆發(fā)的風險。

細胞培養(yǎng)需要哪些設(shè)備

不少人覺得只要有超凈臺以及培養(yǎng)箱就行，實則并非如此。除了關(guān)鍵的二氧化碳培養(yǎng)箱跟生物安全柜之外，一臺可靠的倒置顯微鏡乃是判斷細胞狀態(tài)的“眼睛”。離心機建議挑選帶有水平轉(zhuǎn)子的那種，這樣能最大限度地保護細胞活率。另外，一個精確的移液器以及經(jīng)過驗證的耗材同樣是很關(guān)鍵的——劣質(zhì)培養(yǎng)瓶的透氣蓋有可能在換液的時候引入污染源的。

怎樣判斷細胞狀態(tài)好壞

不要僅僅盯著細胞密度，形態(tài)學以及生長曲線才是關(guān)鍵指標。具備健康狀態(tài)的細胞在貼壁之后輪廓清晰可見，其折射率較高，另外在分裂期期間能夠觀察到顯著的“煎蛋”形態(tài)。要是出現(xiàn)空泡，或者顆粒感增強，又或者漂浮死細胞數(shù)量急劇增多，那就表明環(huán)境方面產(chǎn)生了問題。當傳代之后細胞恢復到對數(shù)生長期所需的時間超過24小時 ，便要去檢查培養(yǎng)基成分是不是已經(jīng)失效，或者血清批次存不存在差異。

提及至此，事實上每一位參與實驗者都會遭遇到這樣的困惑，即明明操作是正確無誤的，然而細胞卻未能成功養(yǎng)活，你覺得在細胞開展培養(yǎng)的整個過程之內(nèi)，最容易被人物色忽視掉的那種如同隱形殺手一般存在的因素，是操作的具體手法，還是環(huán)境所具備的潔凈程度，又或者是試劑批次之間存在的差異？