常用作實(shí)驗(yàn)室工具的 ELISA 試劑盒，其操作看似簡(jiǎn)易，可要想獲取穩(wěn)定且可靠的數(shù)據(jù)，就得對(duì)每個(gè)環(huán)節(jié)有精準(zhǔn)的把控。從試劑盒的挑選直至結(jié)果判定解讀，每一步都隱含著門道。此篇文章將會(huì)從實(shí)際操作的角度出發(fā)，分享幾個(gè)保障實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的關(guān)鍵要點(diǎn)。

如何選對(duì)ELISA試劑盒

市面上ELISA試劑盒種類繁多，在進(jìn)行選擇時(shí)，不能僅僅只依據(jù)價(jià)格來(lái)判斷。首先，必須要清晰明確實(shí)驗(yàn)的目的，到底是檢測(cè)抗原，還是檢測(cè)抗體，樣本的類型究竟是血清，還是細(xì)胞上清，亦或是組織勻漿。重點(diǎn)需關(guān)注試劑盒的檢測(cè)靈敏度以及特異性，這兩個(gè)參數(shù)直接決定了能不能從復(fù)雜的樣本當(dāng)中準(zhǔn)確地捕捉到目標(biāo)分子。與此同時(shí)，一定要仔細(xì)核對(duì)試劑盒的檢測(cè)范圍，保證目標(biāo)物的濃度處于標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性區(qū)間之內(nèi)，不然的話，就可能會(huì)出現(xiàn)樣本值低于或者高于檢測(cè)限的尷尬狀況。

怎樣保證檢測(cè)準(zhǔn)確性

進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，加樣步驟作為操作里最易出錯(cuò)的環(huán)節(jié)，應(yīng)使用calibrated移液器并定期給予校準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性可是其生命線。孵育時(shí)間以及溫度必須嚴(yán)格依照說(shuō)明書去執(zhí)行，恒溫箱的溫度波動(dòng)不應(yīng)當(dāng)超過±0.5℃。洗板的操作需要精準(zhǔn)把握好度，洗得太輕非特異性吸附就會(huì)高，而洗得要是太重那么可能會(huì)把已結(jié)合的抗原抗體復(fù)合物給沖掉。強(qiáng)烈建議每個(gè)樣本都要做復(fù)孔，并且設(shè)置空白對(duì)照、陰性對(duì)照以及陽(yáng)性對(duì)照，這可是評(píng)估實(shí)驗(yàn)是否有效的一種硬指標(biāo)。

試劑盒儲(chǔ)存注意什么

引發(fā)實(shí)驗(yàn)失敗的隱形殺手乃是試劑盒儲(chǔ)存方式不當(dāng)，收到試劑盒之后，要在第一時(shí)間去檢查其中的組分，并且依據(jù)說(shuō)明書將其進(jìn)行分門別類的存放，未用完的預(yù)包被板條必須要連同干燥劑一起密封好之后，方能放回鋁箔袋，放置在2至8℃的環(huán)境當(dāng)中，標(biāo)準(zhǔn)品以及質(zhì)控品一般情況下需要在-20℃C的環(huán)境里進(jìn)行長(zhǎng)期保存，反復(fù)的凍融將會(huì)顯著地降低它們的生物活性，建議把它們分裝成單次使用的量，顯色液和終止液對(duì)于光線較為敏感，需要進(jìn)行避光保存，所有試劑在使用之前都應(yīng)當(dāng)恢復(fù)到室溫，但是千萬(wàn)要忌諱反復(fù)地冷熱交替。

如何避免交叉反應(yīng)干擾

在樣本基質(zhì)之中，干擾物質(zhì)乃是致使假陽(yáng)性或者假陰性出現(xiàn)的常見緣由。就血清或者血漿樣本而言，溶血、脂血亦或是黃疸樣本會(huì)頗為嚴(yán)重地干擾顯色反應(yīng)，這樣的樣本最好重新去采集。當(dāng)遭遇高背景或者非特異性顯色之時(shí)，可以考慮在稀釋液里增加封閉劑的濃度，或者對(duì)樣本稀釋倍數(shù)予以優(yōu)化。另外，洗滌液里的吐溫濃度同樣是關(guān)鍵參數(shù)呢，濃度過低洗滌效果不好，過高的話則有可能破壞抗原抗體結(jié)合。借助預(yù)實(shí)驗(yàn)探尋出最契合當(dāng)前樣本類型的操作條件，常常能夠解決絕大部分干擾問題。